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樣品RNA的制備

更新時間:2025-04-09點擊次數(shù):505
黃頭病毒(Yellow Head Virus,YHV)是一種RNA病毒,黃頭病是對蝦的主要病害之一,病毒感染的靶器官為蝦的鰓、觸角腺、造血組織、淋巴器官等。病蝦發(fā)病初期攝食量增加,然后突然停止吃食,在2~4天內(nèi)會出現(xiàn)臨床現(xiàn)象并死亡。許多瀕臨死亡的蝦聚集在池塘角落的水面附近,其頭胸甲因里面的干胰腺發(fā)黃而變成黃色,對蝦體色發(fā)白,鰓棕色或白色,瀕臨死亡的蝦其外胚層和中胚層發(fā)源的器官會出現(xiàn)全身性的壞死,已納入世界衛(wèi)生組織規(guī)定之檢疫傳染病之一,因此快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用。本產(chǎn)品基于PCR原理開發(fā)。它具有下列特點:
1.一站式,用于不需要單獨準(zhǔn)備每種成分,包括引物和對照。
2.根據(jù)黃頭病毒的保守基因序列設(shè)計的引物,具有良好的特異性。
3.基于染料法qRT-PCR檢測,靈敏度比常規(guī)RT-PCR高10-100倍,可以達到至少1000拷貝/反應(yīng)。
4.使用一管式qRT-PCR技術(shù),RT和PCR兩步在一個試管內(nèi)完成,不需要中間轉(zhuǎn)移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5.本產(chǎn)品足夠50次30μL體系的RT-PCR,只能用于科研,不能用于臨床。
樣品RNA的制備:
如果有N個樣品,必須設(shè)置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的陽性對照梯度稀釋液中的第4號(濃度為1×10E4拷貝/μL,10μL相當(dāng)于1萬拷貝)再加上一定量的水作為制備的陽性對照(加水后其總體積跟樣品一樣,樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求)。可以用水作為制備的陰性對照。
用自選方法純化N+2個樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。
 
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