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當(dāng)前位置:首頁資料下載淀粉分支酶(SBE)試劑盒說明書

淀粉分支酶(SBE)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/4/8點(diǎn)擊次數(shù):470

     淀粉分支酶(Starch branching enzyme,SBE試劑盒說明書

                                         微量法100/48

 

   意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義

SBEEC 2.4.1.18)主要存在于植物中,是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶,測(cè)定SBE活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。

 

測(cè)定原理

直鏈淀粉和碘結(jié)合后在660nm有特征光吸收,SBE使直鏈淀粉含量減少,從而降低了淀粉-碘復(fù)合物在660nm吸收值,一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。

需自備的的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

 

試劑的組成和配制

提取液液體100mL×1瓶,4保存;

試劑一:液體10mL×1瓶,4保存;

試劑二:粉劑×1支,4保存;臨用前每支加入1mL蒸餾水,95℃沸水浴充分溶解后備用;用不完的試劑4保存;

試劑三:液體13mL×1瓶,4保存;

試劑四:液體1mL×1瓶,4保存;

 

粗酶液提取

按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到660 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表

試劑名稱(μL

對(duì)照管

測(cè)定管

95℃水浴1min后滅活的粗酶液

65


粗酶液


65

試劑一

85

85

試劑二

10

10

混勻,37準(zhǔn)確保溫20 min,置95℃水浴中5 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻

試劑三

130

130

試劑四

10

10

混勻,室溫靜置10min,取200uL至微量石英比色皿或96孔板中,660nm讀取各管吸光值。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)個(gè)一個(gè)對(duì)照管。

 

注意:

1、可以在不同對(duì)照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進(jìn)行5min 95℃沸水浴處理。

2、試劑二如有沉淀,務(wù)必沸水浴溶解后使用。

 

SBE活力單位的計(jì)算

1、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:以波長660nm的吸光度下降百分率表示,每mg蛋白在反應(yīng)體系中每降低1%碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE活性(U/mg prot)=( A對(duì)照管-A測(cè)定管)/A對(duì)照管÷Cpr ×100

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:以波長660nm的吸光度下降百分率表示,每g組織在反應(yīng)體系中每降低1%碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE活性(U/g 鮮重)=(A對(duì)照管-A測(cè)定管)/A對(duì)照管÷(W÷V樣總)×100

V樣總:提取液總體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

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