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血清高密度脂蛋白(HDL-C)試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/5/11點(diǎn)擊次數(shù):546

血清高密度脂蛋白(High density lipoprotein cholesterol , HDL-C)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100/96


   正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

高密度脂蛋白血清蛋白之一,主要由肝臟合成,運(yùn)載周?chē)M織中的膽固醇,再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過(guò)膽汁從腸道排出,是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化血漿脂蛋白,是冠心病的保護(hù)因子,俗稱(chēng)“血管清道夫",對(duì)冠心病的臨床診斷是一個(gè)重要的參考指標(biāo)。

 

測(cè)定原理:

用沉淀劑分離血清中的高密度脂蛋白膽固醇,利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇和游離脂肪酸,從而把膽固醇酯轉(zhuǎn)化為FC進(jìn)一步利用膽固醇氧化酶催化FC氧化,生成4-膽甾烯酮和H2O2;再利用過(guò)氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林和酚,生成紅色醌類(lèi)化合物;在500nm有特征吸收峰。

 

需自備的儀器和用品:

離心機(jī),恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體15mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存。臨用前加5mL試劑四充分溶解。

試劑四:液體10mL×1瓶,4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,4℃保存。

 

樣品處理:

取血后3小時(shí)內(nèi)分離血清,將血清樣品與試劑一按照1:1的比例充分混勻,25℃靜置15min,2000g離心15min,上清置于冰上待測(cè)。

 

測(cè)定操作表:

 


空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

蒸餾水(μL

4



標(biāo)準(zhǔn)品(μL


4


樣本(μL



4

試劑二(μL

150

150

150

試劑三(μL

50

50

50

混勻,37℃靜置30min,于1mL玻璃比色皿,空白管調(diào)零,測(cè)定500nm處吸光值A。分別記為A標(biāo)準(zhǔn)管和A測(cè)定管

 

計(jì)算公式:

a.   用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

HDL-C含量(mmol/L= A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管

                     =5×A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管

C標(biāo)準(zhǔn)管:5mmol/L

b96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

HDL-C含量(mmol/L= A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管×C標(biāo)準(zhǔn)管

                     =5×A測(cè)定管÷A標(biāo)準(zhǔn)管

C標(biāo)準(zhǔn)管:5mmol/L

 

注意事項(xiàng):

1. 樣本切勿反復(fù)凍融,最好在取血后12小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。

2. 配置好的試劑三4℃保存可半個(gè)月。

3. 線性范圍為0.15mmol/L-3.8mmol/L。

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