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蔗糖(sucrose)含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/6/1點(diǎn)擊次數(shù):503

蔗糖(sucrose含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100/96

 

 

   意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物,也是糖分運(yùn)輸和儲(chǔ)藏的主要形式。因此,測(cè)定蔗糖含量對(duì)于植物糖代謝具有重要意義。此外,蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。

 

測(cè)定原理:

先用堿與樣品共熱,破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖進(jìn)一步與間苯二酚反應(yīng),生成有色物質(zhì),在480nm下有特征吸收峰。

 

所需的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100ml×1瓶,4保存;

試劑一:液體10mL×1瓶,4保存;

試劑二:液體2ml×1瓶,4保存;

試劑三:液體 20ml×1瓶,4保存;

試劑四:液體 6ml×1瓶,4避光保存;

試劑五:粉劑0.5g×1瓶,常溫保存。

 

蔗糖提取:

稱(chēng)取0.1~0.2g樣本,常溫研碎,加入0.5mL提取液,適當(dāng)研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中,置于80水浴鍋中10min,振蕩3~5次,冷卻后,4000g,常溫離心10min,取上清,加入2mg試劑五,80脫色30min,再加入0.5mL提取液,冷卻后,4000g,常溫離心10min,取上清液測(cè)定。

 

測(cè)定步驟:

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至480nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  樣本測(cè)定,(在EP管中依次加入下列試劑):

試劑(μL

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

樣本



25

試劑一


25


蒸餾水

25



試劑二

15

15

15

   混勻,沸水浴煮沸5min左右(蓋緊,防止水分散失)

試劑三

175

175

175

試劑四

50

50

50

 

混勻,沸水浴30min,冷卻后取200μL至微量石英比色皿或96孔板中測(cè)定480nm處光吸收值,空白管、標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管分別記為A1A2A3??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管。

 

蔗糖含量計(jì)算:

1、按照蛋白質(zhì)含量計(jì)算

蔗糖含量(mg/mg prot)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷V1×Cpr= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr

此法需要自行測(cè)定蛋白濃度。

2、按照樣品質(zhì)量計(jì)算

蔗糖含量(mg/g鮮重)=(C標(biāo)準(zhǔn)管×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)管濃度,1mg/mL;V1:加入樣本體積,0.025mL;V2:加入提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。

注意:Z低檢測(cè)限為100ng/g鮮重或1ng/mg prot

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