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生物堿含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

發(fā)布時(shí)間:2023/9/1點(diǎn)擊次數(shù):989

生物堿含量試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法100 /96

 

   正式測(cè)定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:

生物堿存在于自然界主要為植物,但有的也存在于動(dòng)物中的一類含氮的堿性有機(jī)化合物, 大多數(shù)有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu),氮素多包含在環(huán)內(nèi),有顯著的生物活性,是中草藥中重要的有效成分之一。

 

測(cè)定原理:

生物堿與溴甲酚綠指示劑反應(yīng),生成綠色化合物,在 416nm 處有最大吸收峰。

 

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀、水浴鍋、超聲波清洗器、可調(diào)式移液器、96 孔板、研缽、80%乙醇、氯仿和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 12mL× 1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 30mL × 1 瓶,4℃保存;

試劑三:液體 15mL × 1 瓶,4℃避光保存;

 

生物堿的提?。?/span>

樣本烘干粉碎,過(guò) 80 目篩。稱取約 0.1g 樣本,加入 0.1mL 試劑一,再加入 0.9mL80%乙醇, 充分混勻后轉(zhuǎn)移到EP 管中,超聲波提取 60min, 8000 g25℃離心 10 min,取上清液待測(cè)。另取空 EP 管,加入 0.1mL 試劑一和 0.9mL80%乙醇,混勻后作為空白液。

 

測(cè)定步驟:

1、酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 416nm 處。

2、操作表:在EP 管中加入如下試劑

試劑名稱(µL

空白管

測(cè)定管

樣本


50

空白液

50


試劑二

250

250

試劑三

100

100

混勻,室溫靜置 5min

氯仿

500

500

劇烈振蕩混勻,室溫靜置 40min,吸取下層氯仿層 200µL 96 孔板,416nm 處讀取吸光值

A,ΔA=A 測(cè)定-A 空白,空白管只要做一管。

 

生物堿含量計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 1.915x - 0.0005R2 = 0.9942;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度mg/mL),

y ΔA。

生物堿含量(mg/g 干重)=(ΔA+0.0005)÷1.915×V 樣總÷W= 0.522×(ΔA+0.0005) ÷W

V 樣總:加入提取液體積,1mLW:樣本鮮重,g。


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