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直鏈淀粉含量試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/10/13點(diǎn)擊次數(shù):437

直鏈淀粉含量試劑盒說明書

                                 微量法100/96



    意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈,其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

 

測(cè)定原理:

利用80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在620nm下有吸收峰。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、YI和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶;4℃保存;

試劑二:YI醚100mL×1瓶;(自備)

試劑三:液體100mL×1瓶;4℃保存;

試劑四:液體2mL×1瓶;4℃保存;

試劑五:液體300uL×1瓶;4℃保存;

 

淀粉提?。?/span>

稱取0.01~0.02g烘干樣本(建議稱取約0.01g)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑二(YI醚)振蕩5min,3000g25℃離心5min,棄上清,留沉淀,加入1mL試劑三充分溶解,90℃水浴10min,冷卻后待測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、   分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,蒸餾水調(diào)零。

測(cè)定管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL樣本, 14μL試劑四,120μL蒸餾水,2μL試劑五,44uL蒸餾水,混勻,測(cè)定620nm處吸光值,記為A測(cè)定。

空白管:在96孔板或微量石英比色皿中依次加入20μL試劑三, 14μL試劑四,120μL蒸餾水,2μL試劑五,44μL蒸餾水,混勻,測(cè)定620nm處吸光值,記為A空白。

直鏈淀粉含量計(jì)算:

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=1.755x+0.0062x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL,y吸光。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)=0.57×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2) =0.57×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

 

b. 96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y= 0.8775x+0.0062;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mLy吸光。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1]÷0.8775 ÷(V1×Cpr)=1.14×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/g干重)= [(A測(cè)定-A空白-0.0062)×V1] ÷0.8775/(W×V1÷V2) =1.14×(A測(cè)定-A空白-0.0062) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.02mL;V2:加入提取液體積,1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

Z低檢測(cè)限為1mg/g干重或10μg/mgprot。

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