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木質(zhì)素(Lignin)含量試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/20點擊次數(shù):491

木質(zhì)素Lignin)含量試劑盒說明書

微量法 100/96

 

   :正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

木質(zhì)素是構(gòu)成植物細胞壁的成分之一,是由聚合的芳香醇構(gòu)成的一類物質(zhì),存在于木質(zhì)組織中,主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細胞壁。木質(zhì)素主要位于纖維素纖維之間,起抗壓作用。

 

測定原理:

木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在280nm處有特征吸收峰,280nm的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關。

 

需自備的儀器和用品:

天平、40目篩,玻璃試管、燒杯、離心機,恒溫水浴鍋、封口膜、烘箱、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV)、高氯酸,濃硫酸。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體50mL×1瓶,4℃保存。

試劑三:液體100mL×1瓶,4℃保存。

樣品處理:

樣品80℃烘干至恒重,粉碎,過40目篩,稱取約2mg(記為W)于10mL玻璃試管中(務bi用玻璃試管,不可用Ep管)

 

測定操作表:

 


空白管

測定管

樣本(mg


2

試劑一(μL

500

500

高氯酸(μL

20

20

10mL玻璃試管中,用封口膜密封,充分混勻,80℃水浴40min,每隔10min震蕩一次,然后自然冷卻

試劑二(μL

500

500

充分混勻

上清(μL

20

20

試劑三(μL

980(參照注意事項四)

980(參照注意事項四)

200μL于微量石英比色皿/96孔板,測定280nm處吸光值A。分別記為A空白管和A測定管,ΔA=A測定管-A空白管

 

計算公式:

標準曲線:y = 0.0347x+0.0068R2=0.9889

 

Ligninmg/g干重)= (ΔA-0.0068)÷0.0347×V反總×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷0.002×50

V反總:反應總體積:1.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:稀釋倍數(shù)

 

注意事項:

1. 試劑一有毒性,請操作時做好防護措施,加熱前必須用封口膜密封,以防氣體溢出。

2. 加熱過程中有劇烈反應,震蕩時輕搖,以免壓力過大噴出造成人身傷害。

3. 試劑三具有強刺激性,建議操作過程全部在通風櫥子操作。

4. 取上清加試劑三步驟根據(jù)自己樣品乙?;潭?,試劑三的用量可調(diào)整,保證吸光值在0.1-0.8之間即可,并在公式中參與計算。

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