總多糖含量測(cè)定試劑盒說明書

                                   微量法100管/96樣

注   意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

多糖是生物體中廣泛存在的物質(zhì)，是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚物，它是生物體內(nèi)重要的生物大分子，是維持生命活動(dòng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)的基本物質(zhì)之一。

測(cè)定原理：

利用水提醇沉法提取總多糖，苯酚-硫酸法測(cè)定總多糖含量。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、無水乙醇、濃硫酸、蒸餾水、水浴鍋。

試劑的組成和配制：

試劑一：12mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：無水乙醇，自備；

試劑三：濃硫酸，自備。

總多糖提取：

樣本烘干粉碎，稱取約0.05g樣本，加入1mL水，充分勻漿。100℃水浴提取2h（必須蓋緊蓋子防止水分流失），冷卻后10000g離心10min，取上清。吸取0.2mL上清，慢慢加入0.8mL無水乙醇，混勻后4℃靜置過夜，10000g離心10min，棄上清，沉淀中加入1mL水，充分混勻溶解沉淀。

測(cè)定步驟

1、   酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至490nm。

2、   吸取200µL上清，加入100µL試劑一和0.5mL濃硫酸，混勻后90℃水浴20min，流水冷卻。取200µL加入酶標(biāo)板，于490nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)。

總多糖含量計(jì)算：

以葡萄糖作為對(duì)照品，標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為y = 7.981x - 0.0037，R2 = 0.9973，x為葡萄糖含量（mg/mL），y為吸光值。

總多糖含量(μg/g干重)= (A +0.0037)÷7.981×V1÷V2×V3÷W×1000

=626.49×(A+0.0037) ÷W

V1：醇沉后重新溶解后的體積，1mL；V2：進(jìn)行醇沉的體積，0.2mL；V3，提取時(shí)加入水的體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；1000，mg到μg的換算系數(shù)。