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乳酸含量(lactic acid,LA)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/10/26點擊次數:509

乳酸含量(lactic acid,LA)試劑盒說明書

微量法 100T/48S

 

 

   正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質代謝及細胞內能量代謝密切相關,乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

 

測定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADH H+,H+傳遞給PMS

生成的 PMSH2 還原 INT 生成紅色物質,在 530nm 處有特征吸收峰。

 

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋。

 

試劑組成和配制:

提取液:液體 110mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 2mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1 支,-20℃避光保存。臨用前加入 0.6mL 蒸餾水充分溶解。

試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 6mL 蒸餾水充分溶解。

試劑五:粉劑×1 支,4℃避光保存。標準品:液體 1mL×1 支,4℃保存。

顯色液:臨用前根據用量按照提取液(V):試劑三(V):試劑四(V):試劑五(m=1mL) 0.3mL)3mL)15mg)的比例充分混勻。(注意:現配現用,用多少配多少,在棕色瓶中配制,試劑盒中帶有 4 個棕色空瓶)

 

樣本處理

1.    組織:按照質量(g):提取液體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加入 1mL

提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于 4℃,12000g 離心 10min,取上清測定。

2.    細胞:按照細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~10001  的比例(建議 500萬細胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時間 3min);于 4℃,12000g 離心 10min,取上清測定。

3. 血清:直接測定。

 

測定操作:


樣品對照管

樣品測定管

標準對照管

標準測定管

樣品(μL

10

10



標準品(μL



10

10

H2OμL

60

90

60

90

試劑一(μL

30


30


試劑二(μL

40

40

40

40

顯色液(μL

60

60

60

60

 

:標準對照料管和標準測定管只需測定一次,每個樣品測定管設一個樣品對照管。

 

計算公式

1.按照蛋白含量計算

LA 含量(μmol/mg prot= A 樣÷△A 標×C 標÷ Cpr

= 2×△A 樣÷△A 標÷ Cpr

2.按照樣本質量計算

LA 含量(μmol/g 鮮重)= A 樣÷△A 標×C 標÷ W

= 2×△A 樣÷△A 標÷ W

3.按照細胞數量計算

LA 含量(μmol/104 cell= A 樣÷△A 標×C 標÷ 細胞數量

= 2×△A 樣÷△A 標÷ 細胞數量

4.按照液體體積計算

LA 含量(μmol/mL= A 樣÷△A 標×C

= 2×△A 樣÷△A

C 標:標準品濃度,2mmol/LW:樣本質量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL

 

注意事項:

1.若吸光值超過 2,請進行適當的稀釋后再進行測定,并在計算公式中乘以稀釋倍數。

2.Z低檢出限為 1.8μmol/L

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