中文名稱：芝麻源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Sesame-Derived Material Probe qPCR Kit

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本試劑盒可用于檢測(cè)食品或其他材料中是否有芝麻源性成分。現(xiàn)代食品加工 工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的 感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對(duì)食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時(shí)部分食材還有致敏 性，因此基于基因檢測(cè)的快速靈敏的食材來源檢測(cè)技術(shù)將對(duì)食品監(jiān)管和安全提供 重要的保障。本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的芝麻源性成分探針法熒光定量 PCR 檢測(cè) 試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DN/A 模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)芝麻源性成分 DN/A 高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他物 種的 DN/A 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為 5 個(gè)數(shù)量級(jí)。

6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

2×Probe qPCR MagicMix ：500 μL（紅蓋）

熒光 PCR 專用模板稀釋液：1 mL（綠蓋）

超純水：1 mL（白蓋）

芝麻源性成分探針法 qPCR 引物-探針混合液：150 μL（棕色管）

芝麻源性成分探針法 qPCR 陽(yáng)性對(duì) 照(1×10E7 拷貝/μL))：50 μL（黃蓋）

使用手冊(cè)：1 份

運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑樣品 DN/A。

使用方法一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能 污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本 產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無傳染性的 DN/A 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。 1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。

用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭， 下同。 3. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭，在 4 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所 得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DN/A 的制備

7. 如果有 N 個(gè)樣品待提取，最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的是 PC（樣品制備陽(yáng) 性對(duì)照）和 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢匀￡?yáng)性對(duì)照的 1000 倍稀釋液 10μL 再加上一定量的水，使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致，以此作 為 PC。另外用水作為 NC。

8. 用自選方法純化樣品的 DN/A，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DN/A 提取試劑盒兼 容。

三、Probe qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）

9.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè) 用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用 水做模板），1 個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模 板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好 后最后加）

11. 蓋上蓋子后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR：

四、數(shù)據(jù)處理

12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值 為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品核 酸濃度的 log 值，再推算出其濃度。

13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照 Ct 必須大 于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該 小于或等于 37。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小 于或等于 37 則為陽(yáng)性。如果在 37-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽(yáng)性。

芝麻源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒僅供科研。