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E14 小鼠胚胎干細胞

產(chǎn)品簡介

E14 小鼠胚胎干細胞小鼠胚胎干細胞。該細胞缺乏 HGPRT(HPRT),并且對 0.06 mM 的 6-硫鳥/嘌呤有抗性。當(dāng)在飼養(yǎng)層(胚胎成纖維細胞或 STO 細胞)上培養(yǎng)時,細胞保持未分化狀態(tài)。在沒有飼養(yǎng)層的情況下,細胞自發(fā)分化并形成胚胎結(jié)構(gòu)。當(dāng)注入胚泡中時,細胞可以進入生殖系。在常規(guī)的分子基因修飾技術(shù)之后,它們可用于重構(gòu)小鼠胚胎。培養(yǎng)時需使用昆明白MEF作為飼養(yǎng)層細胞。

產(chǎn)品型號:復(fù)蘇/凍存
更新時間:2025-07-04
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:405
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E14 小鼠胚胎干細胞


細胞特性:

1) 來源:小鼠,129/Ola品系,胚胎內(nèi)細胞團

2) 形態(tài):球形克隆 貼壁生長

3) 含量:>1x10^6  細胞數(shù)

4) 規(guī)格:1mL凍存管包裝

5) 用途:僅供科研使用


運輸和保存:

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。


細胞接收后的注意事項:

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完培6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完培來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。


培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1)準備DMEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                 81%      

優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                                      15 %

GlutaMAX-1谷氨/酰胺                                        1 %

MEM NEAA非必需氨基酸                                    1%

Sodium Pyruvate丙酮酸鈉                                      1%

P/S青霉/素-鏈霉/素                                          1%

β-巰基乙醇                                                          0.5 mL(1000X)

LIF                                                                       5μg(10ng/mL)

使用昆明白MEF作為飼養(yǎng)層細胞。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:wan全培養(yǎng)液 60%%,F(xiàn)BS 30%%,DMSO 10%%現(xiàn)用現(xiàn)配。

我?guī)靸龃鏁r,體積為 500 μl,預(yù)期存活率 70%,每支凍存管的細胞復(fù)蘇,3 至4 天后,會形成 30 至 40 個克隆,建議復(fù)蘇至 1 個 T25 培養(yǎng)瓶中。


細胞處理:

1) 凍存細胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完培重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。


E14 小鼠胚胎干細胞

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