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高致病性豬藍(lán)耳病毒PCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡介

高致病性豬藍(lán)耳病毒PCR檢測(cè)試劑盒豬藍(lán)耳病又名豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的豬的一種傳染病

產(chǎn)品型號(hào):
更新時(shí)間:2024-07-18
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
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高致病性豬藍(lán)耳病毒PCR檢測(cè)試劑盒


商品名稱:高致病性豬藍(lán)耳病毒PCR檢測(cè)試劑盒

英文名稱:Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

豬藍(lán)耳病又名豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)引起的豬的一種傳染病, 不同年齡、 品種和性別的豬均能感染,以流產(chǎn)、死胎、弱胎、木乃伊胎以及仔豬呼吸困難、 敗血癥、高死亡率等為主要特征。2006年迄今,我國多個(gè)省份暴發(fā)的豬藍(lán)耳病被證實(shí)為豬藍(lán)耳病病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,HP-PRRSV),與豬藍(lán)耳病病毒普通株相比,病毒株具有更高毒力和致病性,能引起更高的死亡率。

本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,定性檢測(cè)高致病性豬藍(lán)耳病病毒,對(duì)高致病性豬藍(lán)耳病病毒的診斷及療效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。


【試劑組成】

序號(hào)

組成

50T/

1

HP-PRRSV  RT-PCR反應(yīng)液

875 μL×1

2

HP-PRRSV  混合酶液

125 μL×1

3

HP-PRRSV  陽性對(duì)照

 40   μL×1

4

HP-PRRSV  陰性對(duì)照

 40   μL×1

5

說明書

1






注:陰性對(duì)照為豬基因組DNA,陽性對(duì)照為失去活性的高致病性豬藍(lán)耳cDNA

【儲(chǔ)存條件及有效期】


避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。


【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。


【樣本要求】

1.血液或血清樣品:使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

2.肺臟、淋巴結(jié)和脾臟樣品:取樣本20 g,加少量滅菌PBS,用無菌研磨器研磨至糊狀,再用4倍體積的PBS稀釋成乳劑,8000 rpm 4℃離心10 min,取上清待檢。

3.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

4.樣本收集后可立即檢測(cè);若不能立即檢測(cè),可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,避免反復(fù)凍融。


【使用方法】

1.  試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

n =陰性對(duì)照數(shù)(1T)+陽性對(duì)照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

RT-PCR反應(yīng)液

17.5 μL

混合酶液

 2.5 μL



 (3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μL、終體積25 μL/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對(duì)照和陽性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽性對(duì)照品,終體積為25 μL/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

反應(yīng)體積

25μL

通道選擇

FAM通道采集高致病性豬藍(lán)耳病毒信號(hào)

PCR

反應(yīng)

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

反轉(zhuǎn)錄

 50℃:10分鐘(min

1

預(yù)變性

95℃:3分鐘(min

1

PCR擴(kuò)增

95℃:5秒(s

40


注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

1陽性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct≤35

2陰性對(duì)照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標(biāo)本結(jié)果判定:

1陽性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct≤35或有明顯指數(shù)增長期。

2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在3538范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在3538范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

通道及檢測(cè)結(jié)果

標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果解釋

FAM

陰性(-)

標(biāo)本中未檢出高致病性豬藍(lán)耳病毒RNA

陽性(+)

標(biāo)本中檢測(cè)出高致病性豬藍(lán)耳病毒RNA

【檢驗(yàn)方法的局限性】

1.  當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的Z低檢出XIAN時(shí)可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。

2.  被檢樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

3.  樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。


【產(chǎn)品性能指標(biāo)】產(chǎn)品的Z低檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV≤3%。

【注意事項(xiàng)】

1.  整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

2.  為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

3.  每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對(duì)照。

4.  試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。

5.  試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。

6.  為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。

7.  儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。

8.  ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

9.  實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。

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