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當(dāng)前位置:首頁(yè)資料下載游離脂肪酸(FFA)含量試劑盒(測(cè)植物組織)

游離脂肪酸(FFA)含量試劑盒(測(cè)植物組織)

發(fā)布時(shí)間:2023/5/17點(diǎn)擊次數(shù):440

游離脂肪酸(FFA)含量試劑盒(測(cè)植物組織)

                                               微量法100T/48S

 

 

   正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

FFA既是脂肪水解的產(chǎn)物,又是脂肪合成的底物。FFA的濃度與脂類(lèi)代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān),也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。

 

測(cè)定原理:

在弱酸性條件下,FFA與銅鹽反應(yīng)生成銅皂,在715nm處有特征吸收峰,在一定范圍內(nèi)游離脂肪酸含量與顯色程度呈線性關(guān)系。

 

自備儀器和用品:

研缽、臺(tái)式離心機(jī)、震蕩儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體100mL×1瓶,4保存。

試劑二:液體20mL×1瓶,4保存。

試劑三:液體20mL×1瓶,4保存。

 

樣品中FFA提?。?/span>

組織用蒸餾水沖洗干凈后,用吸水紙吸取表面水分,搗碎后按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)加入試劑一,震蕩提取3h,8000g4離心10min,取上清液待測(cè)。

 

測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到715 nm

2. 對(duì)照管:取上清液0.4mL,加0.2mL試劑二,充分震蕩5min,室溫靜置5min,取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板,調(diào)零。

3. 測(cè)定管:取上清液0.4mL,加0.2mL試劑三,充分震蕩5min,室溫靜置5min,取上層200μL于微量石英比色皿/96孔板,測(cè)定吸光值,記為A。

 

FFA含量計(jì)算:

a. 使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0075 x+ 0.0055,R2=0.994

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFAnmol/mg prot= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr

2按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFAnmol/g 鮮重= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=133×(A-0.0055)÷W

 

V1加入樣本體積,0.4mL;V2:提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g。

 

b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.0038 x+ 0.0055,R2=0.994

1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFAnmol/mg prot= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1×Cpr)=266×(A-0.0055)÷Cpr

2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFAnmol/g 鮮重= (A-0.0055)÷0.0038×V1÷(V1÷V2×W)=266×(A-0.0055)÷W

V1加入樣本體積,0.4mL;V2:提取液體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g

 

注意事項(xiàng):

1.        蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測(cè)定,可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的BCA法蛋白含量測(cè)定試劑盒。

2.        Z低檢出限為2 nmol/mL。

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