日本免费啪啪,骚穴福利在线,大香蕉久久一区干,操美国大骚逼

優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司 · 品質(zhì)創(chuàng)造價值 服務成就未來!
服務熱線:15021281375
DOWNLOAD

資料下載

當前位置:首頁資料下載線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)試劑盒說明書

線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/6/9點擊次數(shù):1160

線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)試劑盒說明書

                                          微量法100/96

 

   意 :正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

ICDHmEC 1.1.1.41)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時將NAD+ 還原為NADH,是三羧酸循環(huán)的限速酶之一,其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。

 

測定原理

ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH,導致340nm處光吸收上升。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

試劑的組成和配制

試劑一:100mL×1瓶,-20保存;

試劑二:20mL×1瓶,-20保存;

試劑三:1.5mL×1支,-20保存;

試劑四:液體20mL×1瓶,4保存;

試劑五:粉劑×1支,4保存;

試劑六:粉劑×1支,-20保存;

 

樣本的前處理:

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、   稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、   將勻漿600g,4離心5min。

3、   棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4離心10min。

4、   上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的ICDHm(此步可選做)。

5、   在步驟④的沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3秒,間隔10秒,重復30次),用于線粒體ICDHm活性測定。

 

測定步驟

1、  分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、  樣本測定

1)在試劑五中加入18mL試劑四充分溶解,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

2)在試劑六中加入1mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;

3)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本、10μL試劑六和180μL試劑五,混勻,立即記錄340nm20s時的吸光值A1 2min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1

 

ICDHm活性計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:mg組織蛋白每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活性單位。

 ICDHm活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(Cpr×V) ÷T=1608×ΔA÷Cpr

2 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活性單位。

 ICDHmnmol/min/g 鮮重)[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=325×ΔA÷W

3 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活性單位。

ICDHm活性(nmol/min/104 cell[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總)÷T=0.65×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cmV樣:加入樣本體積,0.01 mLV樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

 

b.96孔板測定的計算公式如下

1 按樣本蛋白濃度計算

單位的定義:mg組織蛋白每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活性單位。

 ICDHm活性(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr

2 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活性單位。

 ICDHmnmol/min/g 鮮重)[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W× V÷V樣總)÷T=650×ΔA÷W

3 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成1 nmolNADH定義為一個酶活性單位。

ICDHm活性(nmol/min/104 cell[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=1.3×ΔA

V反總:反應體系總體積,2×10-4 LεNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d96孔板光徑,0.5cmV樣:加入樣本體積,0.01 mL;V樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應時間,2min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

文件下載    圖片下載    
聯(lián)系我們
掃碼加微信 移動端瀏覽
Copyright © 2025優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司 All Rights Reserved    備案號:滬ICP備2022019216號-1
技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)    管理登錄    sitemap.xml
国产精品亚洲欧洲精品| 日韩激情视频网| 中文精品久久久久人妻不卡| 艹老师骚叫丝袜足交一区日本| 五月激情很狠操中文字幕老阿姨| 无码不卡中文字幕一区二区在线播放| 骚逼篇免费| 山西省| 91色色免费视频一区二区三区不卡 | 欧美日韩精品女女视频一二| 明光市| 六十路人妻| 殴美日韩亚洲性爱| 视频大鸡巴啪啪| 午夜福利| ,国产成人激情| 大香蕉制服丝袜| 亚洲一区 黑丝| 午夜男人天堂av| 三级AV中文字幕| 大学生高潮流白浆视频免费| 吕梁市| 日韩精品少妇一区二区| 真实3p人妻| 超碰在线激情网| 狠操白虎美女视频| 国产AV一区二区三区精品| 亚州熟女一区| 大鸡巴操逼艹视频| 久久视频精品视逼逼| 国产综合情侣自拍内射黑丝在线| **碰人妻****三区| 欧美丰满二区| 超碰97在线观看污| 精品91蜜桃在线观看一区二区| 大香蕉熟女限定| 中文字幕在线观看一区二区三区四| 中文字幕人妻熟妇又伦| 日本人妻在线自慰| 日韩爱爱久久网站| 黄色片在线观看国产传媒欧美|