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土壤錳過氧化物酶(Soil manganese peroxidase,S-Mnp)試劑盒說明書

發(fā)布時(shí)間:2023/9/25點(diǎn)擊次數(shù):515

土壤錳過氧化物酶(Soil manganese peroxidase,S-Mnp)試劑盒說明書

       微量法100T/48S

 

   :正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

錳過氧化物酶(EC1.11.1.13)是一種含亞鐵血紅素的過氧化物酶,主要存在于擔(dān)子菌中,屬于木質(zhì)素降解酶系,能有效的降解木質(zhì)素及廢水和土壤中比較難降解的氯化物,疊氮化合物、DTT,多環(huán)芳烴等。

 

測(cè)定原理:

錳過氧化物酶在Mn2+存在的條件下,將愈創(chuàng)木酚氧化為四鄰甲氧基連酚,在465nm有特征吸收峰。

 

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、甲苯。

 

試劑組成和配制:              

試劑一:液體12mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體2mL×1支,4℃保存。

試劑三:液體4mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:液體2mL×1支,4℃保存。                        

 

樣品處理:

新鮮土樣風(fēng)干,過30-50目篩。

 

測(cè)定操作:

 


對(duì)照管

測(cè)定管

土樣(mg

40

40

甲苯(μL

30

30

25℃,靜置15min

試劑一(μL

140

120

試劑二(μL


20

試劑三(μL

40

40

試劑四(μL

20

20

充分混勻,于30℃震蕩反應(yīng)3h,于10000rpm,4℃離心10min,取150μL微量石英比色皿/96孔板,測(cè)定465nm處吸光值,記為A對(duì)照管和A測(cè)定管,△A=A測(cè)定管- A對(duì)照管

 

 

 

 

酶活計(jì)算公式:

a.        用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義:每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-MnP活性(nmol/d /g 土樣)= ×V反總÷W÷T= 66.4×△A÷W

ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3h

 

b.       96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

酶活性定義:每克土壤每天氧化1nmol愈創(chuàng)木酚所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

S-MnP活性(nmol/d /g土樣)= ×V反總÷W÷T= 132.8×△A÷W

ε:愈創(chuàng)木酚摩爾消光系數(shù):12100L/mol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V反總:反應(yīng)總體積,0.2mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,3h


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