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土壤漆酶(Soil Laccase,SL)試劑盒說明書

發(fā)布時間:2023/9/26點擊次數(shù):502

土壤漆酶(Soil Laccase,SL)試劑盒說明書

微量法 100T/48S

 

 

注   意 :正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義:

漆酶(Laccase)是一種含銅的多酚氧化酶,屬于銅藍氧化酶家族,廣泛分布于真菌和高等植物中,具有較強的氧化還原能力,在紙漿生物漂白,環(huán)境污染物降解和木質(zhì)纖維素降解以及生物檢測方面有非常廣泛的應(yīng)用。

 

測定原理:

漆酶分解底物 ABTS 產(chǎn)生 ABTS 自由基,在 420nm 處的吸光系數(shù)遠大于底物 ABTS,測定

ABTS 自由基的增加速率,可計算得漆酶活性。

 

自備實驗用品及儀器:

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存。

工作液:粉劑×2 瓶,4℃避光保存,臨用前每瓶加 10mL 試劑一溶解。

 

樣品處理:

新鮮土樣風(fēng)干,過 30-50 目篩。

 

測定操作:

1.      可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 420nm,蒸餾水調(diào)零。


對照管

測定管

樣本(g)

0.02

0.02

試劑一(μL)

250


工作液(μL)


250

37℃震蕩反應(yīng) 10min,冰浴 5min,10000g,4℃離心   5min,分別取上清 200μL 于 420nm 處

測定吸光值,記為記為 A 對照和   A 測定。△A=A 測定-A 對照

 

酶活性計算公式:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

酶活性定義:每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位(U)。

?A

 

SL 活性(nmol/min /g 土樣)= ? ? d ×V 反總÷W÷T= 0.694×△ A÷W

ε:ABTS 毫摩爾消光系數(shù):36L/mmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總:反應(yīng)總體積,

0.25mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,10min

 

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

酶活性定義:每克土壤每分鐘氧化 1nmol 底物 ABTS 所需的酶量為一個酶活力單位(U)。

?A

SL 活性(nmol/min /g 土樣)= ? ? d ×V 反總÷W÷T= 1.388×△ A÷W

ε:ABTS 毫摩爾消光系數(shù):36L/mmol/cm;d:比色皿光徑,0.5cm;V 反總:反應(yīng)總體積,

0.25mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,10min

 

注意事項:

1. 工作液需臨用前配制,并且盡快使用,4℃保存一周,若變色則不能使用。

2. 測定之前進行預(yù)實驗,若吸光值較高,請將樣品用提取液進行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y定,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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