土壤羥胺還原酶（hydroxylamine reductase,HR）試劑盒說明書

   微量法100T/48S

注    意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原態(tài)化合物可作為氫的供體，其強弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響氮肥的利用效率。

測定原理：

硫酸鐵銨中的Fe3+可將羥胺氧化為氮氣，自身被還原為Fe2+，F(xiàn)e2+在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在510nm處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

自備實驗用品及儀器：

天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀、氮吹儀。

試劑組成和配制：

試劑一：液體4mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加4mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體12mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體8mL×1瓶，4℃保存。

試劑五：液體4mL×1瓶，4℃保存。

試劑六：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑七：液體2mL×1瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

 新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。

測定操作表：

計算公式：

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.185x -0.1828，R2 = 0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉(zhuǎn)化1μg羥胺為一個酶活力單位。

HR活性（μg/d /g土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.185×V反總÷W÷T

                 = 36.32×（△A+0.1828）÷W

b. 使用96孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.0925x -0.1828，R2 = 0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉(zhuǎn)化1μg羥胺為一個酶活力單位。

HR活性（μg/d /g土樣）=（△A+ 0.1828）÷ 0.0925×V反總÷W÷T

                 =72.64×（△A+0.1828）÷W

V反總：加入提取液體積，0.28mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：1/24h

注意事項：

1.        土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應(yīng)取表層5cm以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不到。

2.        試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。

3.        反應(yīng)體系最好能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于30℃反應(yīng)1h。